方案優(yōu)勢

HPLC檢測方法使用于止咳平喘類中成藥中摻入的茶堿與二羥丙茶堿化學(xué)藥品檢測分析, 具有較強(qiáng)的可操作性。

采用標(biāo)準(zhǔn)

《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》

方法/原理/步驟

　　色譜條件

　　色譜柱是十八烷基硅烷鍵與硅膠填充柱,即Agela Technologies promosil XBPl8 5μm 4.6 mm×250mm。其流動相比例為流動相A：流動相B= 90:10,茶堿與羥丙茶堿的分離度均在1.5以上。流速為1.0 ml/min,進(jìn)樣量是10μl,檢測波長達(dá)到270 nm,理論板數(shù)不低于1500,柱溫維持在30℃。

　　對照品溶液的制備

　　分別精密的稱取茶堿與二羥丙茶堿對照品5~25ml置于容量瓶內(nèi),再加入甲醇進(jìn)行溶解稀釋至刻度,搖勻作為對照的儲備液。另外在各自稱取1~10ml至容量瓶中加入甲醇溶解稀釋,作為混合的對照品溶液。

　　供試品溶液的制備

　　如果供試品為片劑或丸劑,通常取用1d的服用量,將50ml的細(xì)粉放入容量瓶中,加入適量的甲醇溶解稀釋,同時(shí)選用超聲處理15min,并進(jìn)行振搖使得藥品均勻,放冷至室溫后過濾獲得續(xù)濾液作為供試品溶液。或取口服液體10ml,按照2:8的比例添加氯仿和甲醇,超聲15min后,將液體放冷,加入混合液進(jìn)行稀釋,搖勻?yàn)V過后,將獲得的續(xù)濾液蒸干,所剩的殘?jiān)尤爰状歼_(dá)到25 ml成為供試品溶液。

　　方法學(xué)考察

　　1.線性關(guān)系考察

　　將對照品儲備液分別吸取0.25 ml、1 ml、4 ml以及10 ml,制成濃度為5μg/ml、20μg/ml、80μg/ml、以及200μg/ml的各種標(biāo)準(zhǔn)溶液,再以10μl的進(jìn)樣量注入LC2010C中。根據(jù)峰面積所形成的曲線,得出茶堿與二羥丙茶堿的線性回歸方程為：茶堿：Y=32232X+2031.5,R=0.9998；二羥丙茶堿：Y=19918X+19141, R=0.9996。表明茶堿與二羥丙茶堿線性關(guān)系良好時(shí),其進(jìn)樣量為5~200μg/ml。

　　2.檢出限試驗(yàn)

　　將兩種對照品儲備液溶解稀釋若干倍以后,以10μl的進(jìn)樣量注入LC2010C中,重點(diǎn)記錄主峰高度為噪音峰高3倍時(shí)的色譜圖。最后檢測出茶堿的檢出限為1ng,二羥丙茶堿4ng。

　　3.精密度試驗(yàn)

　　選用線性試驗(yàn)下的混合標(biāo)準(zhǔn)液200μg/ml,注入LC2010C中反復(fù)進(jìn)行5次試驗(yàn)。根據(jù)色譜圖,并計(jì)算出茶堿同二羥丙茶堿的峰面積,最后得出兩種化學(xué)藥品的RSD依次為0.198%和0.170%,可以看出兩種化學(xué)藥品成分的精密度都相當(dāng)高。

　　4.重復(fù)性試驗(yàn)

　　按照回收率試驗(yàn)的樣品,以10μl的進(jìn)樣量注入LC2010C中,前后共進(jìn)行5次,詳細(xì)記錄好每項(xiàng)的色譜圖。得到的茶堿RSD為0.70%,二羥丙茶堿1.03%。從在這樣的檢測試驗(yàn)方法下,可知茶堿與二羥丙茶堿所呈現(xiàn)的重復(fù)性良好。

　　檢測結(jié)果

　　通過上面幾種不同的方法學(xué)試驗(yàn)分析,可以看出該方法適用于茶堿與二羥丙茶堿的高效液相色譜檢測。經(jīng)過精密的HPLC檢測,在37批樣品中不存在添加茶堿與二羥丙茶堿兩種化學(xué)藥品的止咳平喘類中成藥。

儀器設(shè)備

高效液相色譜儀

高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對運(yùn)動時(shí)，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。