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生物分子相互作用無標(biāo)記溶液內(nèi)研究

http://www.9999966666.com 檢測通 時(shí)間:2014-11-25

【摘要】

MicroCal iTC200 是一種用于進(jìn)行生物分子相互作用無標(biāo)記溶液內(nèi)研究的高靈敏度低容量等溫滴定量熱儀。 支持在一次實(shí)驗(yàn)內(nèi)直接測量所有結(jié)合參數(shù),僅用10 μg樣品就可分析從弱到強(qiáng)的各種親和結(jié)合體。 半自動(dòng)維護(hù)最大限度減少了操作人員的干預(yù),系統(tǒng)可升級(jí)至全自動(dòng)的MicroCal Auto-iTC200,使其非常適合那些將來對(duì)速度、靈敏度和較高強(qiáng)度工作的適應(yīng)能力要求極高的實(shí)驗(yàn)室。

方案優(yōu)勢

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采用標(biāo)準(zhǔn)

測量類型:親和力(KD)測量類型:焓?H測量類型:熵 ?S測量類型:化學(xué)計(jì)量(n)樣品量:280μL樣品池容積:200μLInjection syringe volume:40μLInjection volume precision:<1% @ 2μLEquilibration time:< 6min(從25°C 至 5°C)Sample capacity:8-12 / 8h 天Cell material:鎳基合金樣品池:硬幣形Noise:0.2 ncal/s溫度范圍:2℃ ~80℃溫度穩(wěn)定性:± 0.00015°C(25°時(shí))Response time:10s(高反饋)Multiple feedback modes:是(被動(dòng), 高增益,低增益)Automated upgrade available:是電源功率:100-240V,50/60Hz,70W重量:9.4kg尺寸 (寬, 長, 高)::210mm x 350mm x 340mm 運(yùn)行環(huán)境 Temperature (operating):10℃ ~28℃濕度::0% ~70% 相對(duì)濕度,無冷凝

方法/原理/步驟

  MicroCal Auto-iTC200采用等溫滴定量熱法測量各種分子相互作用中所涉及的結(jié)合親和力和熱力學(xué)參數(shù)。

  等溫滴定量熱法(ITC)的原理

  等溫滴定量熱儀測量兩個(gè)分子相互作用時(shí)產(chǎn)生的熱量變化。當(dāng)相互作用的分子由自由狀態(tài)轉(zhuǎn)入束縛狀態(tài)時(shí),非共價(jià)鍵重新分配和形成,從而導(dǎo)致吸熱或放熱。ITC通過測量結(jié)合配偶體混合時(shí)作用于池加熱器以保持參比池和樣品池零溫差所需的差分電功率來監(jiān)測這些熱量變化。

  Prod-autoITC200-1

  ITC系統(tǒng)主要部件示意圖。

  參比池通常注入水。樣品池包括一個(gè)結(jié)合配偶體和一個(gè)盛裝配體的攪拌注射器。配體以小等分試樣注入樣品池中,直到配體濃度比樣品濃度高出2至3倍為止。每次注入配體都會(huì)形成一個(gè)熱脈沖,該脈沖與時(shí)間積分,并進(jìn)行濃度歸一化,以生成kcal/mol對(duì)摩爾比(配體/樣品)的滴定曲線。得出的等溫線配合結(jié)合模型,以生成親和力(KD)、化學(xué)計(jì)量(n)和相互作用的焓(ΔH)。

儀器設(shè)備

  MicroCal iTC200設(shè)計(jì)特點(diǎn)是易于使用和極其靈敏。其親和范圍大,讓親和力從弱到強(qiáng)的親和體分析極具重現(xiàn)性。自動(dòng)清洗和注射器加載功能最大限度減少了操作人員的參與,同時(shí)用戶友好的軟件會(huì)引導(dǎo)所有操作實(shí)現(xiàn)快速、準(zhǔn)確的分析。

  系統(tǒng)直接測量生物化學(xué)結(jié)合過程中釋放或吸收的熱量,然后計(jì)算出結(jié)合親和力(KD)、化學(xué)計(jì)量(n)、焓(ΔH)和熵(ΔS)。樣品制備和系統(tǒng)優(yōu)化工作量最少,數(shù)據(jù)生成快速、方便。

  通過MicroCal iTC200可以研究大量的應(yīng)用,包括表征小分子、蛋白質(zhì)、抗體、核酸、脂類和其他生物分子的分子間相互作用。它也可用于測量酶動(dòng)力學(xué)。

  所有結(jié)合參數(shù)(親和力、化學(xué)計(jì)量、焓和熵)只需一次實(shí)驗(yàn)。

  無需分析開發(fā)過程即可快速獲得初步結(jié)果,無標(biāo)簽、無固定化且無分子量限制。

  僅用10µg蛋白質(zhì)就可靈敏地研究任何生物分子的相互作用。

  直接測量毫摩到納摩級(jí)親和力(KD­S)(10~­2至10-9 M)。

  利用極具競爭力的結(jié)合技術(shù)測量納摩到皮摩級(jí)分解常數(shù)(10-9至10-12M)。

  實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)向?qū)Ш妥詣?dòng)數(shù)據(jù)分析功能支持快速可靠的分析。

  硬幣形池優(yōu)化了樣品混合。

  池容量小—樣品消耗更少。

  非反應(yīng)性鎳基合金具有耐化學(xué)性,與各種生物樣品相容。

  半自動(dòng)裝填、進(jìn)樣和池清洗。

  與非水溶劑相容。

  用戶友好的軟件實(shí)現(xiàn)快速準(zhǔn)確的分析。

  可升級(jí)至全自動(dòng)的MicroCal Auto-iTC200。

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