方案優勢

重現性良好

采用標準

GB/T17813.7-1999《復合預混料中煙酸、葉酸的測定 高效液相色譜法》

方法/原理/步驟

　　色譜條件

　　色譜柱：HitachiLaChromC18(5μm)4.6mmI.D.x250mmL

　　柱溫：30℃

　　流速：1.0mL/min

　　波長：275nm

　　進樣量：20μL

　　流動相：取500mL去離子水，加10mL冰乙酸，1.3mL三乙胺，20mL己烷磺酸鈉(0.005mol/L),用去離子水定容至1L，調pH=3.2，過濾；取上述溶液850mL與150mL甲醇混合，脫氣。

　　溶液制備

　　煙酸貯備液：準確稱取約25mg煙酸置25mL容量瓶中，用流動相溶解并定容；

　　葉酸貯備液：準確稱取約25mg葉酸置25mL容量瓶中，用0.1mol/L碳酸鈉溶液溶解并定容；

　　分別移取一定量煙酸和葉酸貯備液，用流動相稀釋成濃度為10μg/mL的混合標準品溶液，用0.45μm濾膜過濾，進樣測定。

　　實驗結果

　　1、標樣測定

　　根據GB/T17813.7-1999的色譜條件進行實驗，煙酸出峰時間為3.84min，葉酸出峰時間為30.86min，圖1為混合標樣的色譜圖。

　　圖1混合標樣色譜圖

　　2、重復性實驗

　　對混合標準品溶液重復進樣，煙酸6次進樣峰面積的RSD為0.22%，葉酸6次進樣峰面積的RSD為0.11%，重現性良好，結果見下表：

　　表1煙酸峰面積的重現性結果

　　表2葉酸峰面積的重現性結果

　　3、飼料樣品檢測

　　某品牌維生素預混飼料經前處理后測定，檢測結果見圖2。

　　圖2預混飼料樣品色譜圖

　　結論

　　采用日立高效液相色譜儀Primaide四元梯度系統配紫外檢測器，在上述色譜條件下，煙酸和葉酸峰面積的重現性良好；并可以對飼料實際樣品中的煙酸和葉酸進行定性和定量，紫外檢測器靈敏度高，適用于常規定量測定。

儀器設備

　　儀器

　　1)四元梯度泵PM1110

　　2)自動進樣器PM1210

　　3)柱溫箱PM1310

　　4)紫外檢測器PM1410

　　5) PSM色譜工作站。