方案優(yōu)勢

至今為止，10-HDA 含量測定有薄層掃描法、分光光度法、氣相法、液相法，且多見于分析蜂王漿中的10-HDA。薄層掃描法、分光光度法專屬性和準(zhǔn)確性較差，氣相法處理繁瑣，目前最為通用的是HPLC法。 液相法處理簡單、結(jié)果準(zhǔn)確。超聲提取、冷藏沉淀后，用對羧基苯甲酸乙酯做內(nèi)標(biāo)，反相液相色譜法測定蜂王漿及其制品中10-HDA含量。

采用標(biāo)準(zhǔn)

國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)

方法/原理/步驟

　　主要試劑

　　1、純凈水(二次蒸餾水)

　　2、甲醇：分析醇

　　3、乙醇：優(yōu)級純

　　4、內(nèi)標(biāo)物：對羥基苯甲酸甲酯含量99.0%

　　5、10-HAD標(biāo)準(zhǔn)品：99.0%以上。

　　色譜條件

　　色譜柱為Kromasil C18柱，流動相為V(甲醇):V(水):V(磷酸)=55:45:0.2，流速1.0ml/min，對羧基苯甲酸乙酯作內(nèi)標(biāo)，檢測波長210nm。本法簡單、快速、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，回收率高(97.6%～101.8%)。

　　使用前應(yīng)在放有濃硫酸的減壓干燥器內(nèi)減壓干燥24h 6.10-HAD標(biāo)準(zhǔn)溶液：取干燥后的10-HAD標(biāo)準(zhǔn)品約25mg，精密稱定，加無水乙醇溶解并移入1000ml容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻。此溶液每毫升含內(nèi)標(biāo)物約0.65mg。7.鹽酸(C=0.03mol/L)：量取0.1mol/L鹽酸100ml，加入200ml重蒸餾水中。

　　樣品處理

　　樣品解凍至室溫后用玻璃棒攪勻，取約0.5g，置于已稱定的50ml容量瓶中，精密稱定，加0.03mol/L鹽酸1ml和水2ml，置漩渦混合器上混合使樣品溶解，加無水乙醇30ml，邊加邊輕輕搖動，再精密加入內(nèi)標(biāo)溶液10ml，并用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，立即置超聲波中超聲15min，或置漩渦混合器上振蕩15min，取出，在3000r/min下離心10min后測定。如不能及時測定，應(yīng)放置在冰箱中冷藏待測。

儀器設(shè)備

　　儀器設(shè)備

　　1)蜂王漿中葵烯酸檢測分析液相色譜儀LC-600B整套系統(tǒng)由LC600B高壓恒流泵：2臺,SPD600B紫外檢測器：1臺,SCL600B系統(tǒng)控制器：1臺,混合器：1只,7725i手動進(jìn)樣閥：1只,反控色譜工作站：1套(反控主機(jī)),液相色譜柱：1支(C18 4.6*250mn,5um),微量進(jìn)樣器：1支(50ul/100ul),進(jìn)樣支架：1只(進(jìn)樣閥用)等組成；安裝、調(diào)試及使用都非常簡單。

　　2)LC-P600高壓恒流泵是微處理器智能控制的往復(fù)式雙柱塞并聯(lián)泵，具有工作壓力高、脈動小、穩(wěn)定可靠、操作方便等特點。其機(jī)械組件由電腦輔助設(shè)計，各主要零部件均在世界先進(jìn)的數(shù)控加工中心制造，因此具有加工精確度高、泵體密封性能好、零件的互換性好等特點。

　　3)LC-UV600紫外檢測器采用了平行的雙錐孔流通池，樣品池和參照池完全處于對等的條件。錐孔設(shè)計的流通池，可以在同樣的池體積情況下，提高通過池孔的光能量，明顯降低了儀器的靜態(tài)噪音和信號漂移。

　　儀器主要配置

　    1、LC-3000高效液相色譜儀;

　　2、色譜柱：C18，250*4.6*10或250*4.6*5;

　　3、高速離心機(jī)(大于4500r/min；50ml);

　　4、超聲波震蕩儀;

　　5、渦旋混合器;

　　6、分析天平(萬分之一);

　　7、溶劑過濾器(帶0.45um有機(jī)、水系過濾膜和真空泵);