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血清的保存注意事項
(1)需要長期保存的血清必須儲存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月.由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發生污染或玻璃瓶凍裂.
(2)熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已完全解凍的血清.加熱過程中須規則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清的質量.補體參與反應有:細胞毒作用, 平滑肌細胞收縮, 肥大細胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進淋巴細胞和巨噬細胞發生化學趨化和活化.
(3)瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝.在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發生.切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而出現沉淀.
(4)一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌.如發現血清有懸浮物,則可將血清加入培養液內一起過濾,切勿直接過濾血清.
(5)血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質量.可用離心3000rpm, 5分鐘去除,也可不用處理. 顯微鏡下"小黑點":經過熱處理過的血清,沉淀物的形成會顯著增多.有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認為血清受污染.一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清質量,則應立即停止使用,更換另一批號的血清.
(6)切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會破會而影響血清質量.
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試劑及配制
1、緩沖生理鹽水:
( 1) 貯存液: Na2HPO4.12H2O 2.85g
KH2PO4 0.27g
NaCl 17.00g
蒸餾水定容至 100ml
4℃保存備用
( 2)應用液: 5ml 貯存液加 95ml 蒸餾水,再加 10%硫酸鎂 0.1ml, 當日配制, 12 小時內使用。
2、2%綿羊紅細胞:無菌采取綿羊血液,于等量 Alsever 液中可保存 3 周。用前以緩沖液洗 3次,并配成 2%細胞懸液。必要時可用吸光光度法或細胞計數法使懸液細胞濃度標準化。
3、溶血素:將綿羊紅細胞溶血素(效價 1:4000),用應用液做 1:2000 倍稀釋(即 1ml 溶血素加 1999ml 應用液)。
4、待測血清:新鮮血液室溫放置 30min,再 4℃放置 60min,使血塊收縮, 4℃離心( 3000r/min)10min,取上清, -20℃保存。
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