檢測認證人脈交流通訊錄
- 1.簡介
Charm? MRLBLTET快速檢測條,利用免疫原理,運用ROSAò側流技術(快速一步檢測),快速檢測牛奶中的β-內酰胺和四環素殘留,包括氨芐西林、阿莫西林、頭孢乙腈、頭孢氨芐、頭孢洛寧、頭孢唑啉、頭孢哌酮、頭孢喹諾、頭孢噻夫及其代謝物、頭孢呋肟、頭孢匹林、氯唑西林、雙氯西林和青霉素G以及四環素族中的金霉素、土霉素和四環素。檢測限為2ppb,符合歐盟MRL標準,可應用于奶站、養殖戶、實驗室、田間和檢控人員。
l 反應原理
CHARM ROSA抗生素殘留快速檢測儀包括抗生素檢測條、孵育器和讀數儀,主要根據競爭性受體-配體免疫反應進行檢測(受體是細胞在進化過程中形成的細胞蛋白組分,能識別周圍環境中某種微量化學物質;配體是能與受體特異性結合的物質)。檢測條具有兩條俘獲帶,其中一條為檢測帶(T,由配體組成),另一條為控制帶(C)。當樣品與被標記的受體混合后,受體將在俘獲帶上被俘獲,并顯出紅色,隨后可以通過反應后俘獲帶顏色的深淺來判定結果。
2.產品性能
靈敏度 詳見表1:
抗生素殘留
靈敏度(ppb)
歐盟MRL標準(ppb)
Beta-lactam Drug Beta內酰胺類
Amoxicillin 阿莫西林
2.5
4
Ampicillin 氨芐西林
2.5
4
Cefacetrile 頭孢乙腈
6
125
Cefalexin 頭孢氨芐
15
100
Cefalonium 頭孢洛寧
3
20
Cefazolin 頭孢唑啉
8
50
Cefoperazone 頭孢哌酮
4
50
Cefquinome 頭孢喹諾
15
20
Ceftiofur and Metabolite 頭孢噻呋及其代謝物
10
100
Cefuroxime 頭孢呋肟
2
50
Cephapirin 頭孢匹林
4
60
Cloxacillin 氯唑西林
25
30
Dicloxacillin 雙氯西林
20
30
Penicillin G 青霉素G
2
4
Tetracycline Drug 四環素類
Chlortetracycline 金霉素
50
100
Oxytetracycline 土霉素
50
100
Tetracycline 四環素
10
100
交叉反應
以下獸藥殘留在100ppb時不會干擾檢測:氨基糖苷類、酰胺醇類、氟喹諾酮類、大環內酯類/林可胺類、硝基呋喃類、四環素、磺胺類或氯噻嗪、地塞米松、安乃近、呋喃苯胺酸、伊佛霉素、新生霉素、催產素、對氨基苯甲酸、苯基丁氮酮、三氯噻嗪和噻苯咪唑。其他β-內酰胺和四環素可以被檢測到:萘夫西林50-70ppb,苯唑西林40-60ppb,哌拉西林3-5ppb。體細胞濃度為106SCC/ml或細菌濃度為3′105CFU/g時不會干擾檢測。
3.試劑盒組份及另需的材料
試劑盒組份
另需的材料
耗材
設備
MRLBLTET檢測條:100條
MRLBLTET / TET陽性質控:5片
用戶手冊
槍頭
ROSA 孵育器(56℃)
ROSA 讀數儀
打印機(可選)
300 μL 移液器(可選)
4. 試劑制備和儲存
將試劑盒保存在0-7℃條件下,不要冷凍!
l 檢測條
保存在密封的箔罐中,每次檢測前取出所需數量的檢測條后,將箔罐密封好重新放回冰箱。
避免保存在高濕度條件下。箔罐中有一包防潮劑,正常情況下,防潮劑中顆粒呈藍色,若顆粒變為紫色或紅色時則說明濕度太高,檢測條已經變質。
檢測條在室溫條件下可保存12小時。
l 陰性質控
使用β-內酰胺和四環素陰性牛奶作為陰性質控,它不僅可用于性能監控,還可用于溶解陽性質控片。
冷藏下,陰性質控可儲存72小時。
l 陽性質控
未水化時和試劑條一樣干燥低溫保存。
用5ml陰性奶溶解陽性質控片,配制成4±0.4ppb青霉素G 和100±20ppb土霉素陽性質控液,冰浴放置備用,用前振蕩混勻。
陽性質控可在冷藏條件下保存48小時。
l 樣品和質控液的長期儲存
樣品檢測需在奶擠出5天內進行。樣品可分成小份(至少為0.5ml)放在小瓶中冷凍,冷凍的樣品在£-15℃溫度下可保存2個月。
如需長時間保存復原的質控物,在復原6小時內分裝(1mL)冷凍保存,-15℃或更低溫可保存1個月。
解凍的樣品(或陽性質控)置于冰水中振蕩融化。解凍后的樣品冷藏下可儲存24小時。注意如果出現蛋白沉淀,則棄用。解凍后的樣品檢測前需1200g ± 200離心3分鐘。冷卻,使用脫脂牛奶進行檢測。
解凍的樣品未用完的請丟棄,不要再冷凍。
解凍后的陽性質控使用前不需要離心。
脫。
5.注意事項
1) 高脂肪樣品(>6.5%)會導致無效結果。不要將無效的檢測條插入讀數儀。
2) 檢測條上的碎片影響讀數儀光學性能,因此在將檢測條插入讀數儀前,應擦去檢測條上的灰塵和牛奶殘渣,保持設備清潔。
3) ROSA孵育器應保持清潔和水平,溫度應設定在56 ± 1℃。暫時不用時放低孵育器蓋子,但不要鎖定。
4) 因室溫不同,ROSA孵育器達到適合的溫度需要10分鐘左右。
5) 如果樣品為冷凍奶、復原奶或含沉淀物的牛奶,檢測前應1200±200g離心2min,使用脫脂奶進行檢測。低脂奶可增加檢測靈敏度。
6) 請勿使用全脂巴氏殺菌奶進行檢測。
6.實驗流程
l 儀器準備
1) 開啟孵育器電源,稍等至溫度到達56±1℃。
2) 開啟讀數儀,1.08.2或更低版本的讀數儀調整至MRL頻道;1.09.00或更高版本調到TETR頻道的3-line模式。
l 檢測步驟
1) 取出牛奶待檢樣品,搖勻。
2) 將檢測條放置在孵育器的槽中,在檢測條上標記樣品編號。
3) 小心將粘箔撕開,至指示線處。
4) 用移液器取300μl 牛奶樣品,豎直緩慢滴加至檢測條兩側任意一側的凹槽中。將粘箔粘回。
5) 蓋上孵育器塑料蓋,自動開始倒計時。
6) 8分鐘孵育結束后,蜂鳴器響動。打開塑料蓋,取出檢測條,不要擠壓塑料泡處。
7) 目視或通過讀數儀判讀結果。
7.結果分析
l 目測篩選
目測對比質控線(BL/TE)和檢測線(T)的色差。若兩條檢測線中有一條或者兩條顏色均淺于質控線,或檢測線未出現,則說明結果為陽性;若檢測線顏色與質控線相當或深于質控線,則說明結果為陰性;若質控線未出現,質控線模糊或不均勻,BL線、TE線或質控線模糊,則說明結果不可用,需要重新進行檢測。
l 讀數儀結果讀取及分析
將檢測條凸槽向下水平插入讀數儀中,讀取MRL頻道的結果。若需要,進入SAMPLE 或OPERATOR并點擊“ENTER”鍵,8秒內將會出現結果。
如果屏幕上READING結果出現陰性的英文“RESULT NEGATIVE”字樣,樣品為陰性。點擊“Enter”鍵,讀取陰性或陽性結果。
若出現陽性結果,建議重新進行檢測以確定結果。
l 陽性樣品重新檢測
1) 初步檢測為陽性的樣品(復樣)需用同一個陰性質控和陽性質控重新檢測。
2) 陰性質控的結果應為Result:Negative,READING少于-400。
3) 陽性質控的結果應為Result:Positive,READING大于+400。
4) 如果任一質控的結果不在范圍之內,需重新進行上述檢測。如果結果仍不在范圍之內,請放棄,與我們聯系。
5) 如果兩個質控的結果都在范圍之內,并且重新檢測的陽性結果中任一或全部為Result:Positive,那么樣品可判定為β-內酰胺或四環素陽性。
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