使用方法
1. 膠原酶儲(chǔ)存液的配制
向每管100 mg的膠原酶中加入100 ?L的含Ca2+、Mg2+的HBSS（Hank’s平heng鹽溶液，含Ca2+、Mg2+），輕輕旋渦震蕩使其充分溶解，制備成1g/mL（即1000×）的儲(chǔ)存液。然后用低蛋白結(jié)合性的0.22 μm的濾膜過(guò)濾除菌，分裝成小份量，然后于-20 °C避光凍存。
使用前于冰上解凍，避免反復(fù)凍融。其用于組織和細(xì)胞分散的常用濃度為：0.5-2.5 mg/mL，用于軟骨消化的常用濃度為1-2 mg/mL，需要根據(jù)特定的實(shí)驗(yàn)條件或者參考相應(yīng)的文獻(xiàn)資料確定所需的最佳工作濃度。
2．組織的分離
1. 使用無(wú)菌手術(shù)dao或剪刀將組織切成3-4 mm大小的組織塊；
2. 利用含Ca2+、Mg2+的HBSS洗滌組織塊數(shù)次；
3. 加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS，使其浸沒組織塊，并加入膠原酶至需要工作濃度；
4. 于37℃孵育4-18 h。消化時(shí)使用水平搖床以及用3 mM的CaCl2補(bǔ)充消化可以提高消化效率。
5. 已分散開的細(xì)胞可使用不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩篩得，收集備用。未wan全解離的組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃繼續(xù)孵育；
6. 利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細(xì)胞數(shù)次；
7. 細(xì)胞培養(yǎng)液重懸上述細(xì)胞，利用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器或其他方法計(jì)算活細(xì)胞密度。
8. 于細(xì)胞培養(yǎng)皿上利用合適細(xì)胞培養(yǎng)基接種細(xì)胞。
3． 器官灌注
1. 向37℃預(yù)熱的含Ca2+、Mg2+的HBSS中加入膠原酶，另添加3 mM的CaCl2有助于提高分離效率；
2. 按照已優(yōu)化的速率對(duì)相應(yīng)的器官灌注膠原酶工作液；
3. 將上述過(guò)程中回收的灌注液流經(jīng)不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩，從而將已解離的細(xì)胞或小片段組織塊與較大團(tuán)塊分離開來(lái)，未充分解離的組織需利用新鮮膠原酶工作液于37℃進(jìn)一步孵育；
4. 利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細(xì)胞數(shù)次；
5. 細(xì)胞培養(yǎng)液重懸上述細(xì)胞，利用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器或其他方法計(jì)算活細(xì)胞密度。
6. 于細(xì)胞培養(yǎng)皿上利用合適細(xì)胞培養(yǎng)基接種細(xì)胞。
注意事項(xiàng)
1. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2. 本產(chǎn)品主要用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。
更多詳情請(qǐng)咨詢：http://www.78bio-sh.com/Products-37950576.html
https://www.chem17.com/st387922/product_37950576.html