檢測認證人脈交流通訊錄
- 裸鼠成瘤實驗是腫瘤研究中常用的實驗,常用免疫缺陷型小鼠來作為移植瘤模型的載體,通過對該小鼠的注射腫瘤細胞,使其成瘤,觀察流體的生長來判斷其生物學變化。
裸鼠成瘤實驗過程:
1、細胞的狀態是成瘤實驗的關鍵,所以細胞生長狀態一定要好,取處于對數生長期的細胞,細胞達80-90%左右密度為宜。收集細胞前一天晚上更換新鮮培養基。
2、胰酶消化細胞后用預冷的PBS洗兩遍,目的為去除細胞中殘余的血清。
3、用PBS或者無血清培養基吹打細胞沉淀至合適的濃度,一般皮下瘤接種的細胞量為1-5x10^6個細胞/支,接種體積為0.1-0.2ml ,因此細胞懸液的濃度為1-5x 10^7個細胞/ml,如若有條件的實驗室,也可以加基質膠以加速瘤塊的生成,基質膠與PBS或無血清的比列為1:1。
4、細胞消化后應盡快接種到裸鼠皮下,一般盡量在半小時內完成(如果接種量大,可以分批接種) ,途中將細胞懸液放在冰上降低細胞的代謝以保持細胞的活性。
5、選擇的裸鼠一般在4-6周齡,體重16-18g左右,種植部位選擇血供豐富區域,如腋窩中后部。
6、接種前用槍將細胞懸液充分的吹散,防止細胞成團而降低細胞成活率,導致小鼠接種細胞數量的差異過大。
7、接種時,針頭在皮下進針深一點,約1cm深,針頭在皮下左右滑動幾次,以便細胞接種成團,減少注射后細胞懸液從針眼溢出。
8、接種后1-2周左右可以見到皮下開始出現腫塊。
9、根據腫瘤細胞的特性和接種細胞的量,一般皮 下成瘤的周期為1-2個月。腫瘤不宜生長過大,一般不要超過2000mm3。
10、腫瘤大小測量一般為1周兩次,游標卡尺測量腫瘤最長和最短部位。V= 1/2*a*b2 (a為長軸,b為短軸)。
裸鼠成瘤實驗
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