激光共聚焦顯微鏡

內容簡介

Confocal 利用放置在光源后的照明針孔和放置在檢測器前的探測針孔實現點照明和點探測，來自光源的光通過照明針孔發射出的光聚焦在樣品焦平面的某個點上，該點所發射的熒光成像在探測針孔上，該點以外的任何發射光均被探測針孔阻擋。照明針孔與探測針孔對被照射點或被探測點來說是共軛的，因此被探測點即共焦點，被探測點所在的平面即共焦平面。計算機以像點的方式將被探測點顯示在計算機屏幕上，為了產生一幅完整的圖像，由光路中的掃描系統在樣品焦平面上掃描，從而產生一幅完整的共焦圖像。只要載物臺沿著Z軸上下移動，將樣品新的一個層面移動到共焦平面上，樣品的新層面又成像在顯示器上，隨著Z軸的不斷移動，就可得到樣品不同層面連續的光切圖像 。

 

結果展示

 

I:面筋提取物顆粒染色拍照；II：乳膠顆粒染色拍照；III：生物膜細菌的死活分布3D圖；IV:細胞死活染色拍照；V：細胞內線粒體定位；VI: 鬼筆環肽細胞骨架染色；VII: 組織免疫熒光（組織內蛋白定位）；VIII:細胞內熒光探針成像；IX：細胞免疫熒光。

 

 

服務說明

送樣方式：

可接收自行處理好后用于直接拍攝的樣品，由我們提供拍攝服務；也可以委托平臺做前處理，如需前處理請客戶務必于送樣單內附上詳盡的實驗方案和處理步驟；實驗所需的細胞和試劑等可自行提供，也可以委托平臺代購。

需要您提供

1.可直接用于拍攝的片子（直接上機拍攝）

或者2.實驗所需的樣品（含前處理方案+制片方法）

 

服務周期：

一般為樣品接收后的2-3周，具體實驗周期及送樣時間請與客服溝通確認，謝謝！

 

收費說明：

項目	價格
前處理費用	依據具體實施方案議價
2D模式拍攝	300元/樣起
3D模式拍攝	300元/樣起
試劑費用	依據實際訂購價格

最終收費以與工作人員溝通確定的價格為準。

 

交付內容：

2D模式每樣拍攝5-6個視野，3D模式每樣拍攝2-3個視野，結果反饋請在測試完成一周內，不建議回收樣品，如有需要請提前反饋給工作人員。

 

服務簡介

激光掃描共聚焦顯微鏡（Confocal laser scanning microscope，簡稱CLSM）是近代生物醫學圖象儀器。它是在熒光顯微鏡成象的基礎上加裝激光掃描裝置，使用紫外光或可見光激發熒光探針。利用計算機進行圖象處理，從而得到細胞或組織內部微細結構的熒光圖象，以及在亞細胞水平上觀察諸如Ca2+、pH值、膜電位等生理信號及細胞形態的變化。

利用放置在光源后的照明針孔和放置在檢測器前的探測針孔實現點照明和點探測，來自光源的光通過照明針孔發射出的光聚焦在樣品焦平面的某個點上，該點所發射的熒光成像在探測針孔上，該點以外的任何發射光均被探測針孔阻擋。照明針孔與探測針孔對被照射點或被探測點來說是共軛的，因此被探測點即共焦點，被探測點所在的平面即共焦平面。計算機以像點的方式將被探測點顯示在計算機屏幕上，為了產生一幅完整的圖像，由光路中的掃描系統在樣品焦平面上掃描，從而產生一幅完整的共焦圖像。只要載物臺沿著Z軸上下移動，將樣品新的一個層面移動到共焦平面上，樣品的新層面又成像在顯示器上，隨著Z軸的不斷移動，就可得到樣品不同層面連續的光切圖像。

 

樣品要求

1,細胞爬片、石蠟切片、冰凍切片等可用于激光共聚焦的樣本。

2,原樣可是固體原樣，也可以分散后的樣品，質量10-50mg。
3,測試的具體要求信息。

 

檢測項目

可以直接現場進行拍攝，也可以做委托測試

現場測試機時預約

平臺負責機時預約，客戶攜帶樣品前去實驗室自主測試。

樣品委托測試

客戶提供樣品，平臺負責預約機時并安排技術老師去測試，之后發送結果給客戶。

樣品制樣

客戶不清楚如何制樣時，平臺可提供制樣服務，部分載樣工具需收取一定材料費。

 

 

生物掃描電鏡（SEM）

內容簡介

生物SEM介紹

生物掃描電鏡主要利用二次電子成像拍攝材料的表面三維形貌情況，拍攝照片為黑白照片；一般用來觀察細胞外表面的變形以及受損情況等，也可以觀察材料在細胞表面的分布情況，廣泛應用于檢測生物樣品、非均相有機材料、無機材料等微米、納米范圍內的表面特征。

服務說明

送樣方式：

可接收固定好的細胞/組織樣品并附有詳細送檢要求的送樣單

①需要您提供的樣品：收集細胞/組織取樣（新鮮迅速取材），置于1.5ml離心管內，加入2.5%的戊二醛溶液（固定液加滿離心管，使樣品完全浸沒在固定液中），放置于4℃過夜，請不要倒棄固定液，一般固定12h后可寄送。

②打印填寫完整的送樣單和樣品一起寄送。

樣品取材及固定常用方法

細胞類	106以上的細胞，用細胞刮刀刮下來，1500-3000轉離心，5-10min，收集細胞于1.5ml或2ml離心管，管底肉眼可見2-3粒大米狀樣品，如果細胞量很多，把細胞團塊用細針尖挑成幾個小團塊，棄上清，沿管壁緩慢加入4℃預冷的固定液，固定液完全浸沒樣品，然后放入4°C冰箱過夜。
組織類	新鮮取材，取材位置準確，組織大小盡量在1-2mm³，離體取材后請盡快投入4℃預冷的固定液中，固定液完全浸沒組織，然后放入4°C冰箱過夜。
細菌類	吸取OD0.5-0.8的培養物，離心后棄培養基，收集菌體沉淀于管底黃豆大小，可以用PBS洗1-2次，齊上清，沿管壁緩慢加入4℃預冷的固定液，固定液完全浸沒樣品，然后放入4°C冰箱過夜。
*固定液的量請參考上圖，加至箭頭所示位置
*如樣品取材及固定有疑問請及時與 工作人員溝通

 

服務周期：

一般為樣品接收后的2-3周，具體實驗周期及送樣時間請與工作人員溝通確認，謝謝！

 

收費說明：

掃描電鏡全套服務（制片+拍攝）  500元/樣起。

最終收費以與 工作人員溝通確定的價格為準。

 

交付內容：

每樣提供8-10張拍攝圖片，結果反饋請在測試完成一周內，不建議回收樣品，如有需要請提前反饋給工作人員。

服務參數

1． 樣品預處理裝置

1.1組合式液氮泥預冷制備裝置，過冷液氮溫度為-210℃

1.2帶有樣品托裝載機構，可方便對接經高壓冷凍處理或野外預冷樣品的

2．冷凍制備系統冷源

冷凍制備腔室和掃描電鏡冷臺、冷阱均采用過冷氮氣氣冷方式， 制備腔室冷臺和電鏡冷臺在10分鐘內可從室溫降至-140℃以下，控溫精確；配置分體式安裝的21升液氮杜瓦瓶組件，無需補充液氮持續續運行時間長達20小時

3．高真空冷凍制備裝置

3.1真空系統

渦輪分子泵抽氣系統，制備腔室真空度優于10-6 mbar量級（液氮冷卻時）；分子泵配有阻尼隔振裝置，60%以上的系統運行時間內前級旋轉機械泵無需工作

3.2 制備腔室冷臺和冷阱

冷凍制備腔室通過接口與電鏡腔室直接相連，方便樣品在冷凍制備腔室與電鏡冷臺之間的來回傳輸，具有重做樣品的能力

冷臺：溫度范圍為-190℃ ～ +100℃；溫度穩定度為1℃

冷阱：冷臺附近設有防污染冷阱，冷阱溫度可低至-190℃

3.3 樣品傳輸通道采用門閥密封，無需潤滑脂

3.4標配斷裂操縱器冷刀組件斷裂裝置，可選高度可調的冷刀組件；可設置及貯存時間-溫度的升華參數曲線，全自動升華操作；濺射鍍膜頭為低電壓冷濺射工作方式，標配Pt靶，可選其它靶材，全自動濺射鍍膜操作

4．樣品傳輸裝置

4.1結構小巧，易操作

4.2密封方式：采用真空（壓差）及機械擰緊機構雙重密封

5．掃描電鏡冷臺及冷阱

5.1掃描電鏡冷臺和冷阱

冷臺：-190℃ ～ +100℃；溫度穩定度為1℃

冷阱：-190℃或更低

冷臺和冷阱采用獨立的雙氣路冷卻

5.2電鏡腔室配有CCD相機及LED照明，可在觸摸屏上顯示電鏡腔室內部樣品及樣品臺圖像

6．觸摸屏控制

允許用戶自定義方案，可快速輸入和儲存方案以便隨時訪問調用，可實現自動濺射及自動升華刻蝕的功能，并且具有屏幕幫助及操作提示功能。通過CCD相機，屏幕可顯示制備腔室和掃描電鏡腔室內部的圖像

 

服務簡介

功能：普通掃描電鏡服務及冷凍掃描電鏡服務。

掃描電鏡冷凍傳輸系統與場發射掃描電鏡相結合，通過升華、斷裂等方法可直接在含水狀態下觀察樣品形貌，且無皺縮變形、可溶成分也被保留，是不失真觀察生物樣品精細結構的最有效方法。

特點：該系統可與當今主流的場發射掃描電鏡相結合，具有操作簡便、形貌保真的特點。

 

檢測項目

適用于液體、半液體、生命材料及其它對各種干燥敏感的樣品（如溶膠、高分子材料等）的制備。

 

 

生物透射電鏡（TEM）

內容簡介

生物TEM介紹

生物透射電鏡是觀察和研究超微結構的重要工具，可用于觀察細胞整體結構、亞細胞結構。生物細胞樣品內部形態觀察建議用專門應用于生物樣品觀察的透射電鏡，其電壓在80-120kv可以降低生物樣品因高能電子束輻射而損傷的影響，同時依賴于生物樣品制備技術的發展，如超薄切片技術、負染色技術、冷凍制樣技術、細胞化學技術等，廣泛應用于組織學、細胞學、病毒學、病理學及材料學等多個學科的研究中，如常用來觀察細胞整體結構、細胞膜細胞壁細胞器的變化、材料進入細胞內部的分布情況、細胞應付外界刺激產生的自噬小體，以及外界生物入侵的侵染結構等等。

 

服務說明

送樣方式：

可接收固定好的細胞/組織樣品并附有詳細送檢要求的送樣單

①需要您提供的樣品：收集細胞/組織取樣（新鮮迅速取材），置于1.5ml離心管內，加入2.5%的戊二醛溶液（固定液加滿離心管，使樣品完全浸沒在固定液中），放置于4℃過夜，請不要倒棄固定液，一般固定12h后可寄送。

②打印填寫完整的送樣單和樣品一起寄送。

樣品取材及固定常用方法

細胞類	106以上的細胞，用細胞刮刀刮下來，1500-3000轉離心，5-10min，收集細胞于1.5ml或2ml離心管，管底肉眼可見2-3粒大米狀樣品，如果細胞量很多，把細胞團塊用細針尖挑成幾個小團塊，棄上清，沿管壁緩慢加入4℃預冷的固定液，固定液完全浸沒樣品，然后放入4°C冰箱過夜。
組織類	新鮮取材，取材位置準確，組織大小盡量在1-2mm³，離體取材后請盡快投入4℃預冷的固定液中，固定液完全浸沒組織，然后放入4°C冰箱過夜。
細菌類	吸取OD0.5-0.8的培養物，離心后棄培養基，收集菌體沉淀于管底黃豆大小，可以用PBS洗1-2次，齊上清，沿管壁緩慢加入4℃預冷的固定液，固定液完全浸沒樣品，然后放入4°C冰箱過夜。
*固定液的量請參考上圖，加至箭頭所示位置
*如樣品取材及固定有疑問請及時與工作人員溝通

 

服務周期：

一般為樣品接收后的3-4周，具體實驗周期及送樣時間請與工作人員溝通確認，謝謝！

 

交付內容：

每樣提供8-10張拍攝圖片，結果反饋請在測試完成一周內，如需回收剩余物料及切片，請提前備注清楚，樣本回收默認測試完成一周后寄出，如需盡早回收樣本，請及時反饋給工作人員。

服務簡介

       以動物模型及體外培養細胞模型為研究對象，研究疾病的發生發展規律，從而闡明疾病本質的生物醫學基礎學科。超微病理學技術是研究疾病的病因、發生發展機制，以及其形態和功能變化等的重要手段之一。超微病理學技術主要分為標本制作和電鏡分析。

 

樣品要求

     標本類型主要有動植物組織器官、培養及脫落細胞、細菌、真菌、藍藻等，均需進行以下制樣過程。

1．固定 標本離體或離開原生活狀態1分鐘后立即投入4℃預冷的2.5％戊二醛緩沖電鏡固定液中，取材時應絕對避免擠壓、損傷，推薦大小為1mm3 或者截面積為1mm2的5mm長條隨后送檢。

2．標本制作  送檢后標本需經過四氧化鋨后固定、脫水、樹脂半浸透、樹脂全浸透、樹脂包埋、高溫聚合、超薄切片及染色。

 

透射電鏡生物樣品取材基本要求 

第一 取材準備   

1） 試劑   所需 2.5%戊二醛、0.1M PH7.35 的磷酸鹽緩沖液，注明配制日期及啟用日期，置于 4 攝氏度冰箱預冷（2.5%戊二醛預冷至少 1 小時以上；磷酸鹽緩沖液不宜長時間預冷，容易結晶）。 

2） 儀器與器材   鋒利刀片（手術刀片或飛鷹雙面刀片）、鑷子、低溫操作臺、1.5mlEP管、培養皿（或者硬紙卡，盛戊二醛用）、注射器（植物組織用）、冷凍離心機（細菌、細胞、藻類等需要離心的樣品使用） 

2. 取材要求 

1） 快 

取材動作要迅速，材料離體后 1min 鐘內必須進入戊二醛固定液，使組織、細胞盡可能保持原來生活狀態，解剖器械要用鋒利的刀片（新的手術刀片或飛鷹雙面刀片）劃切，避免牽拉或擠壓，盡量減少取材中的機械損傷。（動物處死后 5min 內完成此步驟，時間越短越好！） 

2） 準

取材要準確 

①器官要準確； 

②部位要準確：如觀察腎臟腎小球或腦神經元需取皮質而不要取髓質，觀察胰島盡量取胰尾。 

③胃腸道、皮膚、角膜、視網膜、耳蝸、骨骼肌等要注意方向性（橫切或縱切），取材成條狀（0.5mm×1mm×3mm），確保要觀察的部位在較長的切面上。 

3） 冷 

取材過程應在 0~4 攝氏度的操作臺上操作（或者是冰上操作，但要注意切勿使組織直接接觸或貼近冰面，需要以操作面板隔離，以免操作時間過長而造成組織結冰出現冰晶損傷），所有器械、容器、2.5%戊二醛、PBS 需 4℃預冷足夠長的時間。 

4） 小 

不定位組織大小為 1mm×1mm×1mm（盡可能小，可以更小為 0.5mm×0.5mm×1mm，越薄越好），如肝、肺、脾等不需要看特定結構的非定位器官組織；定位組織如神經、骨骼肌、腎、腦、腸、血管、胰島等組織取材大小為 0.5mm×1mm×3mm的長條狀（越薄越好）。 

 

第二  不同樣本的取材方法

生物器官組織取材 

1. 浸入固定   麻醉（1%戊巴比妥鈉銨 5ml/kg 體重腹腔注射）或斷頭急性處死，解剖出所需器官，用解剖刀（鋒利刀片）取一小塊組織，立即（越快越好，1~3min 完成此操作）放入盛有預冷 2.5%戊二醛的培養皿（或硬紙片上）中，隨后立即沿小塊組織邊緣（已經被固定）用鋒利刀片取 1mm×1mm×1mm 或 0.5mm×1mm×3mm 大小組織置于盛有預冷 2.5%戊二醛 1.5mlEP 管中繼續固定，4℃保存（請勿靠近冰箱邊上造成標本冷凍結冰！！！）。 

2. 灌注固定   腦組織等（初次取材者或未常規做灌注固定者此方法慎用，因在 TEM 結果出來前無法評價其固定是否成功）。 

 

培養細胞取材 

1. 貼壁細胞   培養好的細胞不經漂洗直接倒出培養液后迅速加足量預冷 2.5%戊二醛固定10min，隨后用細胞鏟或細胞刷成 45°鈍角鏟下細胞（勿用胰蛋白酶消化）后全部轉移到15~50ml 離心管內，轉速 800rpm 離心 5min，隨后去除大部分上清液（留 1ml 左右），將離心管里的細胞輕輕吹散后轉移到 1.5ml 的 EP 管內1000~1500rpm（盡量低轉速，視不同細胞而言，建議先做一個轉速梯 800、1000、1500rpm 度試驗，找到最低可以離心成團的轉速）離心 5~10min 成團（細胞團大小約半個至一個綠豆大小為宜）。離心完成后輕輕吸去上清液，管底的細胞團不要打散，沿管壁緩緩倒入適量的預冷 2.5%戊二醛，隨后置于4℃冰箱固定。（此過程操作輕柔，切勿損傷細胞！） 

2. 懸浮細胞   直接將細胞培養液全部轉移到 15~50ml 離心管內，轉速 800rpm 離心 5min，隨后去除大部分上清液（留 1ml 左右），將培養管里的細胞輕輕吹散后轉移到 1.5ml 的 EP管內，1000~1500rpm（盡量低轉速，視不同細胞而言，建議先做一個轉速 800、1000、1500rpm 梯度試驗，找到最低可以離心成團的轉速）離心 5~10min 成團（細胞團大小約半個至一個綠豆大小為宜）。離心完成后輕輕吸去上清液，管底的細胞團不要打散，沿管壁緩緩倒入適量預冷 2.5%戊二醛，隨后置于 4℃冰箱固定。（此過程操作輕柔，切勿損傷細胞！） 

3. 細菌懸液（固體培養基自行轉移成懸浮液）   直接將細菌懸液全部轉移到 15~50ml 離心管內，轉速 800~1500rpm 離心 5min，隨后去除大部分上清液（留 1ml 左右），將培養管里的細胞輕輕吹散后轉移到 1.5ml 的 EP 管內，1500~3000rpm（視不同細菌而言，自行加大轉速，建議不超過 5000rpm）離心 5~10min 成團（細胞團大小約半個至一個綠豆大小為宜）。離心完成后輕輕吸去出上清液，管底的細胞團不要打散，沿管壁緩緩倒入適量預冷 2.5%戊二醛，隨后置于 4℃冰箱固定。（此過程操作輕柔，切勿損傷細菌！） 

 

植物組織取材 

    植物取材較容易，取一小塊植物組織浸入盛有預冷 2.5%戊二醛培養皿（或硬紙卡）上，隨后用鋒利刀片切成 0.5mm×0.5mm×3mm 小長條薄片，隨后抽取氣體。  抽取氣體   將植物組織同固定液一起倒入注射器，用乳膠手套食指堵住注射器出口，右手拉動針栓，將注射器口垂直向上，松開食指，右手輕推針栓使液面上的氣泡從注射器口排出，反復多次，直至組織沉入固定液。 

 

 透射電鏡生物樣品運輸基本要求 

用封口膜將 1.5mlEP 管管蓋再次封好，做好標記，填好送樣申請單（必須填，隨樣品寄出紙質版申請單）。隨后插在海綿板或可以減震的塑料上，用廢舊報紙包裹，放入 1~2 個冰袋，樣品盡可能遠離冰袋固定放置，以防樣品出現冰晶損傷，寄出。 

 

檢測項目

一．     樣品包埋 送檢后標本需經過四氧化鋨后固定、脫水、樹脂半浸透、樹脂全浸透及樹脂包埋后高溫聚合。

二．     超薄切片 聚合后的組織樹脂包埋塊須在萊卡EM UC7超薄切片機下定位后，切下50-70nm薄片，隨后用銅網撈片。

三．     鉛鈾染色 制作好的樣品銅片經醋酸鈾染色10min，后硝酸鉛再染色10min，即可閱片

四．     拍照分析 按照客戶拍照目的及拍照要求進行分析。